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Solarbio小分子化合物(熒光染料篇)

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熒光染料是指吸收某一波長的光波后能發(fā)射出另一波長大于吸收光的光波的物質(zhì)。由于靈敏度高,操作方便,逐漸取代了放射性同位素作為檢測(cè)標(biāo)記,其廣泛應(yīng)用于熒光免疫,細(xì)胞染色等。熒光染料即可以單獨(dú)使用,也可以組合成復(fù)合熒光染料使用,用于染色體分析、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡等相關(guān)研究。另有很多核酸染料在多色染色系統(tǒng)中是非常有用的復(fù)染劑,可作為背景對(duì)照,標(biāo)記細(xì)胞核使細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)的空間關(guān)系一目了然。






以下對(duì)幾種常用的熒光染料進(jìn)行了具體的介紹及實(shí)例圖。文末附常用熒光染料的Ex(nm)/Em(nm),干貨滿滿,超實(shí)用,別忘了收藏哦!

常用核酸染料

DAPI(Cat: ID2250)

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DAPI是結(jié)合富含A-T堿基對(duì)DNA序列的熒光染料。DAPI是一種能夠與DNA中大部分A,T堿基相互結(jié)合的熒光染料﹐常用于熒光顯微鏡觀測(cè)。因?yàn)镈API可以透過完整的細(xì)胞膜﹐它可以用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞的染色。當(dāng)DAPI與雙鏈DNA結(jié)合時(shí),最大吸收波長為358nm,最大發(fā)射波長為461nm。DAPI的發(fā)射光為藍(lán)色,且DAPI和綠色熒光蛋白GFP或Texas Red染劑(紅色熒光染劑)的發(fā)射波長僅有少部分重疊,可以利用這項(xiàng)特性在單一的樣品上進(jìn)行多重?zé)晒馊旧?/p>

一般的,用于細(xì)胞核染色時(shí),推薦的DAPI工作濃度為0.5-10μg/mL。

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Zhang J, et al. BMC Cancer. 2022 Apr 26;22(1):457.


Hoechst 33342(Cat: IH0070)

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Hoechst 33342是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,它在嵌入雙鏈 DNA后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光,對(duì)細(xì)胞的毒性較低。Hoechst 33342染色常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè),染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。Hoechst 33342也常用于普通的細(xì)胞核染色,或常規(guī)的DNA染色。Hoechst 33342的最大激發(fā)波長為346nm,最大發(fā)射波長為460nm;Hoechst 33342和雙鏈DNA結(jié)合后,最大激發(fā)波長為350nm,最大發(fā)射波長為461nm。

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Liu Yanhong,et al. ACS applied

materials & interfaces,2020,12(13)

細(xì)胞凋亡檢測(cè)

JC-1(Cat: IJ0300)

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JC-1是一種廣泛用于檢測(cè)線粒體膜電位△Ψm的理想熒光探針。在線粒體膜電位較高時(shí),JC-1 聚集在線粒體的基質(zhì)中,形成聚合物,可以產(chǎn)生紅色熒光;在線粒體膜電位較低時(shí);JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中,此時(shí)JC-1為單體,可以產(chǎn)生綠色熒光。線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件。通過JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變可以很容易地檢測(cè)到細(xì)胞膜電位的下降,同時(shí)也可以用JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變作為細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)檢測(cè)指標(biāo)。

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Ma H, et al. ACS Appl Mater Interfaces. 

2020 Apr 8;12(14):16104-16113.

活性氧檢測(cè)

DCFH-DA(Cat: ID3130)

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DCFH-DA本身沒有熒光,可以自由穿過細(xì)胞膜,進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后,可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細(xì)胞膜,從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測(cè)DCF的熒光就可以知道細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平。

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Li S, et al. Free Radic Biol Med. 2021 Jan;162:435-449.


ROS熒光探針-DHE(Cat: ID3560)

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DHE是一種可滲透細(xì)胞的藍(lán)色熒光探針,是過氧化物指示劑,可用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)superoxide radical anion,能有效地檢測(cè)活性氧類。這種染料可以自由地進(jìn)入細(xì)胞中,脫氫后成為Ethidium。DHE可以直接用于活細(xì)胞的標(biāo)記。DHE被活細(xì)胞攝入后,可以在細(xì)胞內(nèi)的超氧化物陰離子作用下脫氫,產(chǎn)生Ethidium。Ethidium可以和RNA或DNA結(jié)合產(chǎn)生紅色熒光。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)的超氧化物陰離子水平較高時(shí),產(chǎn)生的Ethidium較多,紅色熒光就較強(qiáng),反之則較弱。DHE本身為藍(lán)色熒光,最大激發(fā)波長為370nm,最大發(fā)射波長為420nm,脫氫后和RNA或DNA結(jié)合產(chǎn)生紅色熒光,最大激發(fā)波長為300nm,最大發(fā)射波長為610nm,實(shí)際觀察時(shí)也可以使用535nm作為激發(fā)波長。

一般的,用于細(xì)胞內(nèi)超氧化物陰離子檢測(cè)時(shí),DHE的常用濃度為1-10μM。

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Yan ZQ, et al. Plant Signal Behav. 

2020 Oct 2;15(10)1795581.

鈣離子濃度檢測(cè)

Fluo-3 AM(Cat: IF0150)

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Fluo-3 AM是常用的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一。它穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成 Fluo-3,從而被滯留在細(xì)胞內(nèi),F(xiàn)luo-3若以游離配體形式存在時(shí)幾乎是非熒光性的,但是當(dāng)它與細(xì)胞內(nèi)鈣離子結(jié)合后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光,最大激發(fā)波長為506nm,最大發(fā)射波長為526nm。實(shí)際檢測(cè)時(shí)推薦使用的激發(fā)波長為488nm左右,發(fā)射波長為525-530nm。可以使用激光共聚焦顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。

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Li Q, et al. Advanced Functional Materials,

 2021, 31(37): 2104630.

其他染料

尼羅紅(Cat: IN0170)

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尼羅紅是一種親脂性的惡嗪類熒光染料,與脂類物質(zhì)結(jié)合并發(fā)出熒光,在激發(fā)波長530nm激發(fā)下,顯示強(qiáng)烈桔紅色熒光。常用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂滴。

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Liu C, et al. Nat Commun. 2022 Apr 13;13(1):1989.


Calcein-AM(Cat: IC4630)

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Calcein-AM是一種可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑,它穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Calcein,從而被滯留在細(xì)胞內(nèi),發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。Calcein的激發(fā)和發(fā)射波長分別為490nm和515nm。Calcein-AM和PI經(jīng)常被結(jié)合用來作為活細(xì)胞和死細(xì)胞的雙重染色。

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Liu X, et al. Micromachines (Basel). 

2021 Jun 10;12(6):681.


FITC(Cat: IF0080)

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FITC是在熒光素的基礎(chǔ)上通過化學(xué)反應(yīng)增加(異)硫氰酸基團(tuán)得到的,硫氰酸基團(tuán)可以和生物活性物質(zhì)例如蛋白質(zhì)上的伯胺基團(tuán)反應(yīng)形成硫脲鍵,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)生物活性物質(zhì)的熒光標(biāo)記。FITC能和各種抗體蛋白等物質(zhì)結(jié)合,通過在熒光顯微鏡下觀察或流式細(xì)胞儀分析可進(jìn)行定性、定位或定量的檢測(cè)。

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[Mw A, et al. Journal of Materials

Science & Technology, 2021, 70:224-232.


常用熒光染料Ex/Em參數(shù)

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注:以上信息僅供參考,具體信息建議參考對(duì)應(yīng)產(chǎn)品說明書。


更多產(chǎn)品

貨號(hào)

名稱

描述

IC0740

CY7

是一種熒光標(biāo)記染料

IC0750

CY7-SE

是一種熒光標(biāo)記染料

IC0760

CY3-SE

是一種熒光標(biāo)記染料

IC0770

CY3

是一種熒光標(biāo)記染料

IC0780

CY5

是一種熒光標(biāo)記染料

IC0790

CY5-SE

是一種活性染料,用于標(biāo)記肽,蛋白質(zhì)和寡核苷酸中的氨基。

IC0800

CY3-YNE

是用于標(biāo)記可溶性蛋白,肽和寡核苷酸/DNA的染料。

IF0070

5(6)-FITC

5(6)-FITC(FITC)是一種胺活性衍生物的熒光染料,具有廣泛的應(yīng)用,作為抗體和其他探針標(biāo)記等。

IF0081

FITC

FITC是熒光素的衍生物,用于標(biāo)記胺。

IL0230

D-Luciferin

Sodium Salt

在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應(yīng),接著被氧化形成二氧雜環(huán)丁烷結(jié)構(gòu)并發(fā)出黃綠色的光。

IL0240

Luminol

是化學(xué)發(fā)光試劑,與一定的氧化劑反應(yīng)時(shí)能發(fā)出藍(lán)光。


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