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通用細(xì)胞凍存液的操作

細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實驗順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段。在細(xì)胞建株和建系中，及時凍存原始細(xì)胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中，雜交瘤細(xì)胞、每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存保種常常是不可少的實驗操作。因為在沒有建立一個穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時候，細(xì)胞的培養(yǎng)過程中隨時可能因細(xì)胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導(dǎo)致實驗失敗，如果沒有原始細(xì)胞的凍存，則因為上述的意外而前功盡棄。通用細(xì)胞凍存液可用于培養(yǎng)細(xì)胞的凍存。

通用細(xì)胞凍存液的使用步驟：

1、培養(yǎng)細(xì)胞至對數(shù)生長晚期，顯微鏡觀察其外觀、形態(tài)、有無污染等，取狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行凍存操作。

2、離心，棄上清。

3、加入適量的通用細(xì)胞凍存液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1~10×10^₆/ml，置于凍存管中，密閉、不要擰的太緊，避免彎曲變形。

4、一般遵循1℃/min的速率進(jìn)行冷凍。亦可采用4℃ 20min，-20℃ 30min，-70℃過夜，然后置于液氮罐中長期存儲。

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