鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說(shuō)明
貨號(hào)：C8062
保存：4℃保存，切勿凍存，有效期為一年。
規(guī)格：10mg, 5mg/ml, 溶解于 0.006mol/L HAc, 無(wú)菌。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
索萊寶鼠尾膠原蛋白 I型(rattailtendon collagen type I)是通過(guò) Birkedal-Hansen的方法，通過(guò)醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。本公司鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞。也可用于制備三維膠，模擬真實(shí)的生長(zhǎng)環(huán)境，使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長(zhǎng)。
1，在使用索萊寶鼠膠原蛋白I型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細(xì)胞的貼壁和生長(zhǎng)。
2，在 1mg/ml濃度以上，pH為7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠，檢查到NIH-3T3細(xì)胞在三維膠內(nèi)正常生長(zhǎng)、PC-12細(xì)胞在三維膠表面正常生長(zhǎng)。
使用方法：
1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度： 1-5ug/cm2
以包被濃度為 2 ug/cm2 為例：用無(wú)菌0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/ml。
按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中：
按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中：
表面積（cm2 ,每孔或每皿） 加入 0.012mg/ml 膠原的體積( ul )
96孔細(xì)胞培養(yǎng)板 0.3 50
24孔細(xì)胞培養(yǎng)板 1.9 300
12孔細(xì)胞培養(yǎng)板 3.8 600
6孔細(xì)胞培養(yǎng)板 9.5 1580
35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿 8 1330
60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿 21 3500
100mm細(xì)胞培養(yǎng)皿 55 9170
確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面，開(kāi)蓋在超凈臺(tái)上過(guò)ye晾干。也可以在室溫放置 1小時(shí)后，用PBS洗3-4次后直接使用。包被好的器皿在 4-25℃少可保存3個(gè)月以上的時(shí)間。
2、三維膠原的制備
鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH 7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中，在成膠過(guò)程中需要加入0.06×體積的 0.1mol/L NaOH 來(lái)中和。
需要的溶液（均需要無(wú)菌、預(yù)冷）：10×PBS（可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示）或 10×培養(yǎng)液，, 0.1mol/L NaOH，0.1mol/L 乙酸(一般不用)，雙蒸水
A． 不含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入100ul 10×PBS
或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。
B．含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞，并放置于冰浴中。將200ul鼠尾膠原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入23ul 10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。加入760ul的細(xì)胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注意事項(xiàng)：
鼠尾膠原蛋白I型在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠，在操作過(guò)程中要盡量保持低溫。
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