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琥珀酸脫氫酶（SDH）活性檢測試劑盒

操作步驟：

一、樣本的前處理：組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：

1、 稱取約0.1g 組織或收集500 萬細(xì)菌或細(xì)胞，加入1mL 試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

2、 將勻漿600g，4℃離心5min。

3、 棄沉淀，將上清液移另一離心管中，11000g，4℃離心10min。

4、 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的SDH（此步可選做）。

5、 在步驟④的沉淀中加入200uL 試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3 秒，間隔10 秒，重復(fù)30 次），用于線粒體SDH 活性測定。

二、測定步驟和加樣表

1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長600nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 樣本測定（1）在試劑四中加入18mL 蒸餾水充分溶解，置于37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min； 用不完的試劑4℃保存一周；（2）在試劑五中加入1mL 蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存一周；（3）在微量石英比色皿或96 孔板中加入10μL 樣本、10μL 試劑五和180μL 試劑四，混勻，立即記錄600nm 處20s 時(shí)的吸光值A(chǔ)1 和 1min20s 后的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算ΔA=A1-A2。

琥珀酸脫氫酶(SDH)活性檢測試劑盒

a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。 SDH 活性（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=952×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計(jì)算單位的定義：每g 組織每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。 SDH 活性（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=192×ΔA÷W

（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算單位的定義：每1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。 SDH 活性（nmol/min/10 4 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.385×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10 -4 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù)，2.1×10 4 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

b. 用96 孔板測定的計(jì)算公式如下

（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。 SDH 活性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1904×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計(jì)算單位的定義：每g 組織每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。 SDH 活性（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=384×ΔA÷W

（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算單位的定義：每1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。 SDH 活性（nmol/min/10 4 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.77×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10 -4 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù)，2.1×10 4 L / mol /cm；d： 96 孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，0.202mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

試劑一：100mL×1 瓶，-20℃保存；試劑二：20mL×1 瓶，-20℃保存；試劑三：1.5mL×1 支，-20℃保存；試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存；試劑五：粉劑×1 支，-20℃保存；

相關(guān)文獻(xiàn)： 

《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448