產(chǎn)品名稱:瓊脂糖凝膠CL-2B
產(chǎn)品型號(hào):
產(chǎn)品特點(diǎn):瓊脂糖凝膠CL-2B適用于工業(yè)規(guī)模生產(chǎn),廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的凝膠色譜純化。
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瓊脂糖凝膠CL-2B
貨號(hào):S8731
規(guī)格:10ml/100ml
一、瓊脂糖凝膠CL-2B簡(jiǎn)介
瓊脂糖凝膠CL-2B是在瓊脂糖凝膠2B的基礎(chǔ)上通過交聯(lián)使微球的剛性增強(qiáng),理化性能提高,有利用于工業(yè)生產(chǎn)。該介質(zhì)用于生物大分子的凝膠層析。
本品呈白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質(zhì)。
二、親和填料特性
項(xiàng) 目 | 指 標(biāo) |
基 質(zhì) | 2%交聯(lián)瓊脂糖 |
排阻極限 | 70000~40×106 (球蛋白) |
形狀 | 球形 |
粒徑 | 60~200 μm |
檢測(cè)流速 | 100 cm/h* |
耐熱 | pH7水中120℃20min |
耐壓 | 0.025 MPa |
pH穩(wěn)定性 | 3~13(長(zhǎng)時(shí)間),2~14(短時(shí)間,在位清洗) |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 可耐8mol/L尿素、6mol/L鹽酸胍;可耐有機(jī)溶劑,如乙醇、DMF、THF、DMS、CH3Cl、丙酮、二甲基甲酰胺、二氯乙烷、吡啶、乙腈 |
*檢測(cè)條件: 層析柱10mm×300mm *柱床高15cm,25℃,流動(dòng)相為0.1mol/LNaCl。
三、 適用范圍
本產(chǎn)品具有很高的化學(xué)穩(wěn)定性、高流速、較好的機(jī)械性能、可多次重復(fù)使用等特點(diǎn),非特異性吸附低,回收率高,可用有機(jī)溶劑及1~2mol/L 的NaOH在位清洗,適用于工業(yè)規(guī)模生產(chǎn),廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的凝膠色譜純化。
四、注意事項(xiàng)
產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~25℃(保存溶液為20% 乙醇),通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。
用過的柱子貯存在4℃(20% 乙醇)。
本產(chǎn)品避免與氧化劑接觸;避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中。
保質(zhì)期:5年。
五、操作步驟:
1、裝柱
凝膠過濾介質(zhì)的使用對(duì)裝柱的要求較高,為了保證分離效果,一般通過柱子上加一個(gè)裝柱器來使分離柱裝滿凝膠,或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進(jìn)行檢驗(yàn)。
以下過程為通用介質(zhì)裝填過程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子,可在柱床穩(wěn)定后將柱床壓緊,接好管路。
(1)讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。
(2)選擇一根一定直徑的柱子,長(zhǎng)約30~60cm,根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠(約為柱床體積的1.15倍),清洗掉20%乙醇,抽干,用緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。
(3)將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務(wù)必使底端無氣泡。
(4)用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,連結(jié)好柱子頂端柱頭。
(5)打開蠕動(dòng)泵,讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過,使柱床穩(wěn)定。用緩沖液平衡柱子,到柱床穩(wěn)定。
(6)推薦用一個(gè)裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平,上好柱頭。
2、平衡
讓緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導(dǎo)和pH不變。
3、上樣
(1)樣品用緩沖液配制,渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。含鹽量過大、濃度過小的樣品要先做處理,再上樣。
(2)介質(zhì)對(duì)樣品組分的分離是按組分分子量大小進(jìn)行的,分子量大的先流出來。
(3)上樣體積約為柱體積的1~2%,越小分離越好。
4、洗脫
用緩沖液洗脫,洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。
5、再生
一般用緩沖液洗到平衡,可再次使用。
6、在位清洗
(1)對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白,可以用2M Nacl去除。
(2)對(duì)沉淀蛋白、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類,可用1M NaOH 去除。
(3)對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等,用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,否則容易產(chǎn)生氣泡。
清洗完畢后,用少3倍緩沖液平衡柱子。
7、注意
在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候,要避免柱子流干,氣泡進(jìn)入。
8、去熱源
用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時(shí)或用0.1M的氫氧化鈉24小時(shí)?;蛴靡韵路椒ú襟E去除:
(1)2倍柱體積的70%乙醇;
(2)2倍柱體積50mM Tris-HCl pH7.5;
(3)1倍柱體積4M尿素;
(4)3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl;
以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。
9、 消毒
用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積,初始緩沖液平衡柱子。
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