產(chǎn)品名稱:硝酸還原酶(NR)活性檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品型號(hào):BC0080
產(chǎn)品特點(diǎn):硝酸還原酶(NR)活性檢測(cè)試劑盒測(cè)定意義:NR廣泛存在于植物中,是植物硝態(tài)氮轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮的關(guān)鍵酶,也是誘導(dǎo)酶,對(duì)作物的產(chǎn)量和品質(zhì)有影響。
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硝酸還原酶(NR)活性檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣 產(chǎn)品商標(biāo):solarbio
保存與運(yùn)輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價(jià)格:300
庫存狀態(tài):現(xiàn)貨
關(guān)鍵字: 硝酸還原酶檢測(cè)試劑盒|NR檢測(cè)試劑盒|硝酸還原酶|試劑盒
簡要介紹:
NR廣泛存在于植物中,是植物硝態(tài)氮轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮的關(guān)鍵酶,也是誘導(dǎo)酶,對(duì)作物的產(chǎn)量和品質(zhì)有影響。
NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,NO3ˉ+NADH+H+→NO2ˉ+NAD++H2O ;產(chǎn)生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下,與對(duì)氨基ben磺酸及α-萘胺定量生成紅色偶氮化合物;生成的紅色偶氮化合物在540 nm有大吸收峰,可用分光光度法測(cè)定。
產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容:
誘導(dǎo)劑儲(chǔ)備液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
提取液:液體25mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體40mL×1瓶,-20℃保存。
試劑二:液體10mL×1瓶,-20℃保存。
試劑三:液體20mL×1瓶,4℃保存。
試劑四:液體20mL×1瓶,4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)液:NaNO2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1mL,10μmol/mL,-20℃保存。
誘導(dǎo)劑應(yīng)用液的配制:用時(shí)將誘導(dǎo)劑儲(chǔ)備液稀釋10倍,即取10mL誘導(dǎo)劑儲(chǔ)備液加90mL蒸餾水,充分混勻。
標(biāo)準(zhǔn)液的配制:將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用蒸餾水稀釋為1.5、1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1μmol/mL 濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液 。
產(chǎn)品說明:
NR( EC 1.7.1.3)廣泛存在于植物中,是植物硝態(tài)氮轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮的關(guān)鍵酶,也是誘導(dǎo)酶,對(duì)作物的產(chǎn)量和品質(zhì)有影響。
NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,NO3ˉ+NADH+H+→ NO2ˉ +NAD++H2O;產(chǎn)生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下,與對(duì)–氨基ben磺酸α-萘胺定量生成紅色偶氮化合物;生成的紅色偶氮化合物在540 nm有大吸收峰,可用分光光度法測(cè)定。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣品測(cè)定的前處理
1、取適量誘導(dǎo)劑于燒杯中,將新鮮標(biāo)本洗凈,濾紙吸干,放入誘導(dǎo)劑應(yīng)用液中(淹沒即可),浸泡2h,取出樣本,濾紙吸干后,-20℃冷凍30min,取出樣本,濾紙吸干。(根據(jù)需要進(jìn)行誘導(dǎo)處理)
2、稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液,冰浴研磨,4000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測(cè)。
二、測(cè)定步驟
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長540nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測(cè)定(在EP管中加入下列試劑)
試劑名稱(μL) | 加樣孔 | |||
測(cè)定管 | 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 | |
樣本 | 100 | 100 | ||
標(biāo)準(zhǔn)溶液(μmol/mL) | 100 | |||
雙蒸水 | 100 | |||
試劑一 | 375 | 375 | 375 | 375 |
試劑二 | 125 | 125 | 125 |
混勻后,37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴30min
試劑二 | 125 | |||
試劑三 | 250 | 250 | 250 | 250 |
試劑四 | 250 | 250 | 250 | 250 |
混勻,顯色20min,4000g 常溫離心10min,取上清,540nm下比色,計(jì)算A測(cè)定-A對(duì)照。
注意:空白管只需測(cè)一次。
三、NR活性計(jì)算:
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:
以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為x軸,以ΔA(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)為y軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到線性回歸方程y=kx+b。將(A測(cè)定-A對(duì)照)帶入方程中,計(jì)算出x(μmol/mL)。
2. NR活性的計(jì)算:
(1)按樣本鮮重計(jì)算:
單位定義:每小時(shí)每g鮮重樣品中催化產(chǎn)生 1μmol NO2ˉ的量為一個(gè) NR活力單位。
NR(U/g 鮮重)=x×V樣品÷(W÷V樣總×V樣品)÷T= 2x÷W。
(2)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位定義:每小時(shí)每mg組織蛋白催化產(chǎn)生 1μmol NO2ˉ的量為一個(gè) NR活力單位。
NR(U/mg prot)=x×V樣品÷(V樣品×Cpr)÷T=2x÷Cpr。
V樣品:吸取樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,0.5h;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。
相關(guān)文獻(xiàn):
《FIP1 Plays an Important Role in Nitrate Signaling and Regulates CIPK8 and CIPK23 Expression in Arabidopsis》 作者:Chao Wang, Wenjing Zhang, Zehui Li, Zhen Li, Yingjun Bi, Nigel M. Crawford and Yong Wang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.716 PMID:
《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作者:Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:30558146
《The trehalose-6-phosphate synthase TPS5 negatively regulates ABA signaling in Arabidopsis thaliana》 作者:Lianfu Tian,Zijing Xie,Changqing Lu,Xiaohua Hao,Sha Wu,Yuan Huang,Dongping Li,Liangbi Chen 期刊:Plant Cell Rep. 影響因子:3.499 PMID:30963238
硝酸還原酶(NR)活性檢測(cè)試劑盒
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