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產(chǎn)品名稱:羊臟器組織淋巴細(xì)胞分離液試劑盒

產(chǎn)品型號(hào):P5830

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):羊臟器組織淋巴細(xì)胞分離液試劑盒
貨號(hào):P5830
規(guī)格:200ml/KIT
保存 :室溫避光儲(chǔ)存,有效期少 2 年。

免費(fèi)咨詢:010-50973130

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P5830羊臟器組織淋巴細(xì)胞分離液試劑盒的詳細(xì)資料:

羊臟器組織淋巴細(xì)胞分離液試劑盒
貨號(hào) :P5830
規(guī)格 :200ml
保存 :室溫避光儲(chǔ)存,有效期少 2 年。

試劑盒內(nèi)容 :

全血及組織稀釋液 200ml
細(xì)胞洗滌液 200ml
試劑C 200ml
試劑F 200ml
說(shuō)明書(shū) 1 份


脾臟組織單細(xì)胞懸液的制備方法
注 :A .全過(guò)程及所需試劑要求無(wú)菌環(huán)境 。
B .本試劑盒中不包含膠原酶,若采用酶消化法制備單細(xì)胞懸液 , 請(qǐng)客戶根據(jù)各實(shí)驗(yàn)室要求另購(gòu)不同類(lèi)型膠原酶 。
     1. 剪碎法:將組織塊放入平皿后,加入少量F液及20%胎牛血清;用眼科剪將組織剪勻漿狀,加入5mlF液及20%胎牛血清;用吸管吸取組織勻漿,用100目不銹鋼濾網(wǎng)(另購(gòu))過(guò)濾到試管內(nèi);離心沉淀1500轉(zhuǎn)/分×3min,再用細(xì)胞洗滌液清洗3次,每次以500rpm短時(shí)低速離心除去細(xì)胞碎片,以200目不銹鋼濾網(wǎng)(另購(gòu))過(guò)濾去細(xì)胞團(tuán)塊。作細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為(2~5)×10 7 個(gè)/ml。常溫下放置, 待測(cè)細(xì)胞的活力。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細(xì)胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個(gè)/ml的單細(xì)胞懸液備用。
     2. 勻漿器法:用眼科剪將組織剪成小塊;放入70ml組織研磨器內(nèi),加入2mlF液及20%胎牛血清;緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)研棒,研磨勻漿;用5mlF液及20%胎牛血清沖洗研器;收集細(xì)胞懸液,經(jīng)200目不銹鋼濾網(wǎng)(另購(gòu))過(guò)濾;
離心沉淀800rpm×2min ,再用細(xì)胞洗滌液洗3次,離心沉淀。作細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為(2~5)×10 7個(gè)/ml。常溫下放置, 待測(cè)細(xì)胞的活力。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細(xì)胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個(gè)/ml的單細(xì)胞懸液備用。
    3. 酶消化法:
     A.用F液將膠原酶稀釋,終濃度為400 U/ml,于冰浴備用。
     B.取一適當(dāng)大小培養(yǎng)皿進(jìn)行操作:用鑷子夾碎動(dòng)物脾臟,加入稀釋后的膠原酶,37℃消化20分鐘。
     C.以100或200目不銹鋼濾網(wǎng)(另購(gòu))過(guò)濾,離心沉淀800prm×2min ,再用細(xì)胞洗滌液洗3次,離心沉淀。作細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為(2~5×10 7 個(gè)/ml。常溫下放置, 待測(cè)細(xì)胞的活力。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細(xì)胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個(gè)/ml的單細(xì)胞懸液備用。

 

細(xì)胞計(jì)數(shù)方法:
    細(xì)胞計(jì)數(shù)法是用來(lái)計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液中細(xì)胞數(shù)量的一種方法。一般利用計(jì)數(shù)板(血球計(jì)數(shù)板)進(jìn)行。既可用于分離(散)細(xì)胞培養(yǎng)接種前計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量,也可用于對(duì)培養(yǎng)物的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)。
    不論計(jì)數(shù)的對(duì)象如何,均須制備分散的細(xì)胞懸液。
    計(jì)數(shù)與計(jì)算過(guò)程
    1)在細(xì)胞計(jì)數(shù)板中央放置計(jì)數(shù)的蓋玻片。
    2)用玻璃虹吸管吸取細(xì)胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計(jì)數(shù)板凹蹧處流出懸液,蓋玻片被液體充滿為止。
    3)置顯微鏡下計(jì)數(shù)四角大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)。對(duì)于壓線的細(xì)胞只計(jì)數(shù)在上線和左線者,對(duì)于細(xì)胞團(tuán)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)。
    4)按下式計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液的密度: 細(xì)胞密度=(4個(gè)大格細(xì)胞總數(shù)/4)×10 4 個(gè)/ml×稀釋倍數(shù)公式中乘以10 4 因?yàn)橛?jì)數(shù)板中每一個(gè)大格的體積為:
1.0mm(長(zhǎng))×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm 3 而 1ml=1000mm 3


細(xì)胞計(jì)數(shù)要點(diǎn):
    A.進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí),要求懸液中細(xì)胞數(shù)目不低于10 4 個(gè)/ml,如果細(xì)胞數(shù)目很少要進(jìn)行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中;顯微鏡下計(jì)數(shù)時(shí),遇到2個(gè)以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán),應(yīng)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)算。如果細(xì)胞團(tuán)>10%,說(shuō)明細(xì)胞分散不充分; 或細(xì)胞數(shù)<200個(gè)/10mm 2 或>500個(gè)/10 mm 2 時(shí),說(shuō)明稀釋不當(dāng),需重新制備細(xì)胞懸液。
   B.要求細(xì)胞懸液中的細(xì)胞分散良好,否則影響計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。
   C. 取樣計(jì)數(shù)前, 應(yīng)充分混勻細(xì)胞懸液, 尤其是多次取樣計(jì)數(shù)時(shí)更要注意每次取樣都要混勻, 以求計(jì)數(shù)準(zhǔn)確;
   D.?dāng)?shù)細(xì)胞的原則是只數(shù)完整的細(xì)胞,若細(xì)胞聚集成團(tuán)時(shí),只按照一個(gè)細(xì)胞計(jì)算。如果細(xì)胞壓在格線上時(shí),則只計(jì)上線,不計(jì)下線,只計(jì)左線,不計(jì)右線。
   E. 操作時(shí),注意蓋玻片下不能有氣泡,也不能讓?xiě)乙毫魅肱赃叢壑?,否則要重新計(jì)數(shù)。
? 脾臟淋巴細(xì)胞分離方法
   1.取1ml脾臟細(xì)胞懸液(細(xì)胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個(gè)/ml)小心疊加在C 液之液面上(比例為1:1),20℃±2℃,400g(約1500 轉(zhuǎn)/分),離心20 分鐘(半徑15cm 水平轉(zhuǎn)子)。
   2. 此時(shí)離心管中由上下細(xì)胞分四層。*層;為稀釋液層。第二層;為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層。第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細(xì)胞層。收集第二層細(xì)胞放入含細(xì)胞洗滌液4-5 毫升的試管中,充分混勻后,以500g(約1800 轉(zhuǎn)/分)離心20 分鐘。沉淀經(jīng)反復(fù)洗滌2 次即得所需淋巴細(xì)胞。
注: 提取率約為80%。


分離圖例:

三 、  注意事項(xiàng)
     A. 本分離液是敏光型的,在運(yùn)輸和貯藏過(guò)程中應(yīng)在18℃-25℃避光保存,啟封后置4℃保存避免微生物污染。另外,本品為真空包裝,未啟封前置于10℃ 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
     B. 待分離的骨髓要求新鮮,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復(fù)溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時(shí)分離效果好,且所有操作過(guò)程一定要在無(wú)菌條件下進(jìn)行。
     C. 由于各品牌離心機(jī)的性能不同,國(guó)內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響分離效果,用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù),調(diào)節(jié)離心的時(shí)間,摸索佳的分離條件(具體分離條件各實(shí)驗(yàn)室自定)。
     D. 好使用無(wú)靜電反應(yīng)的離心管,推薦使用未經(jīng)過(guò)堿處理的玻璃離心管。


四 、 產(chǎn)品性能指標(biāo)

pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
內(nèi)毒素 ≤0.5EU/ml
無(wú)菌 直接接種培養(yǎng)14 天后培養(yǎng)基澄清
澄明度及不溶性顆粒物 每50ml 溶液中含10µm 以上的不溶性微粒20 粒以下,
含25µm 以上的不溶性微粒5 粒以下


五 、 貯藏及保存期限
     18℃-25℃避光保存,有效期兩年。啟封后置4℃保存,有效期一周。
     注:若保證無(wú)微生物污染,啟封后可置4℃長(zhǎng)期保存。但應(yīng)注意保存溫度較低時(shí)本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。

 

羊臟器組織淋巴細(xì)胞分離液試劑盒訂購(gòu)說(shuō)明:

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預(yù)訂,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整,部分城市可到17點(diǎn)整,因超過(guò)截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后,將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。


運(yùn)輸說(shuō)明:

1、極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來(lái),再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品:低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來(lái),再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品:常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中無(wú)需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫(kù)房人員快速配貨,準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。

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