產(chǎn)品名稱:鴨臟器組織淋巴細胞分離液試劑盒
產(chǎn)品型號:P5800
產(chǎn)品特點:鴨臟器組織淋巴細胞分離液試劑盒貨號:P5800規(guī)格:200ml/KIT保存 :室溫避光儲存,有效期少 2 年。
免費咨詢:010-50973130
鴨臟器組織淋巴細胞分離液試劑盒
貨號 :P5800
規(guī)格 :200ml
保存 :室溫避光儲存,有效期少 2 年。
試劑盒內(nèi)容 :
全血及組織稀釋液 200ml
細胞洗滌液 200ml
試劑C 200ml
試劑F 200ml
說明書 1 份
脾臟組織單細胞懸液的制備方法
注 :A .全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境 。
B .本試劑盒中不包含膠原酶,若采用酶消化法制備單細胞懸液 , 請客戶根據(jù)各實驗室要求另購不同類型膠原酶 。
1. 剪碎法:將組織塊放入平皿后,加入少量F液及20%胎牛血清;用眼科剪將組織剪勻漿狀,加入5mlF液及20%胎牛血清;用吸管吸取組織勻漿,用100目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過濾到試管內(nèi);離心沉淀1500轉(zhuǎn)/分×3min,再用細胞洗滌液清洗3次,每次以500rpm短時低速離心除去細胞碎片,以200目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過濾去細胞團塊。作細胞計數(shù)并調(diào)整細胞濃度為(2~5)×10 7 個/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個/ml的單細胞懸液備用。
2. 勻漿器法:用眼科剪將組織剪成小塊;放入70ml組織研磨器內(nèi),加入2mlF液及20%胎牛血清;緩慢轉(zhuǎn)動研棒,研磨勻漿;用5mlF液及20%胎牛血清沖洗研器;收集細胞懸液,經(jīng)200目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過濾;
離心沉淀800rpm×2min ,再用細胞洗滌液洗3次,離心沉淀。作細胞計數(shù)并調(diào)整細胞濃度為(2~5)×10 7個/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個/ml的單細胞懸液備用。
3. 酶消化法:
A.用F液將膠原酶稀釋,終濃度為400 U/ml,于冰浴備用。
B.取一適當大小培養(yǎng)皿進行操作:用鑷子夾碎動物脾臟,加入稀釋后的膠原酶,37℃消化20分鐘。
C.以100或200目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過濾,離心沉淀800prm×2min ,再用細胞洗滌液洗3次,離心沉淀。作細胞計數(shù)并調(diào)整細胞濃度為(2~5×10 7 個/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個/ml的單細胞懸液備用。
細胞計數(shù)方法:
細胞計數(shù)法是用來計數(shù)細胞懸液中細胞數(shù)量的一種方法。一般利用計數(shù)板(血球計數(shù)板)進行。既可用于分離(散)細胞培養(yǎng)接種前計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量,也可用于對培養(yǎng)物的細胞數(shù)量進行計數(shù)。
不論計數(shù)的對象如何,均須制備分散的細胞懸液。
計數(shù)與計算過程
1)在細胞計數(shù)板中央放置計數(shù)的蓋玻片。
2)用玻璃虹吸管吸取細胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計數(shù)板凹蹧處流出懸液,蓋玻片被液體充滿為止。
3)置顯微鏡下計數(shù)四角大方格內(nèi)的細胞總數(shù)。對于壓線的細胞只計數(shù)在上線和左線者,對于細胞團按單個細胞計數(shù)。
4)按下式計數(shù)細胞懸液的密度: 細胞密度=(4個大格細胞總數(shù)/4)×10 4 個/ml×稀釋倍數(shù)公式中乘以10 4 因為計數(shù)板中每一個大格的體積為:
1.0mm(長)×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm 3 而 1ml=1000mm 3
細胞計數(shù)要點:
A.進行細胞計數(shù)時,要求懸液中細胞數(shù)目不低于10 4 個/ml,如果細胞數(shù)目很少要進行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中;顯微鏡下計數(shù)時,遇到2個以上細胞組成的細胞團,應(yīng)按單個細胞計算。如果細胞團>10%,說明細胞分散不充分; 或細胞數(shù)<200個/10mm 2 或>500個/10 mm 2 時,說明稀釋不當,需重新制備細胞懸液。
B.要求細胞懸液中的細胞分散良好,否則影響計數(shù)準確性。
C. 取樣計數(shù)前, 應(yīng)充分混勻細胞懸液, 尤其是多次取樣計數(shù)時更要注意每次取樣都要混勻, 以求計數(shù)準確;
D.數(shù)細胞的原則是只數(shù)完整的細胞,若細胞聚集成團時,只按照一個細胞計算。如果細胞壓在格線上時,則只計上線,不計下線,只計左線,不計右線。
E. 操作時,注意蓋玻片下不能有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中,否則要重新計數(shù)。
? 脾臟淋巴細胞分離方法
1.取1ml脾臟細胞懸液(細胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個/ml)小心疊加在C 液之液面上(比例為1:1),20℃±2℃,400g(約1500 轉(zhuǎn)/分),離心20 分鐘(半徑15cm 水平轉(zhuǎn)子)。
2. 此時離心管中由上下細胞分四層。*層;為稀釋液層。第二層;為環(huán)狀乳白色淋巴細胞層。第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細胞層。收集第二層細胞放入含細胞洗滌液4-5 毫升的試管中,充分混勻后,以500g(約1800 轉(zhuǎn)/分)離心20 分鐘。沉淀經(jīng)反復(fù)洗滌2 次即得所需淋巴細胞。
注: 提取率約為80%。
分離圖例:
三 、 注意事項
A. 本分離液是敏光型的,在運輸和貯藏過程中應(yīng)在18℃-25℃避光保存,啟封后置4℃保存避免微生物污染。另外,本品為真空包裝,未啟封前置于10℃ 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
B. 待分離的骨髓要求新鮮,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復(fù)溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時分離效果好,且所有操作過程一定要在無菌條件下進行。
C. 由于各品牌離心機的性能不同,國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響分離效果,用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù),調(diào)節(jié)離心的時間,摸索佳的分離條件(具體分離條件各實驗室自定)。
D. 好使用無靜電反應(yīng)的離心管,推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。
四 、 產(chǎn)品性能指標
pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
內(nèi)毒素 ≤0.5EU/ml
無菌 直接接種培養(yǎng)14 天后培養(yǎng)基澄清
澄明度及不溶性顆粒物 每50ml 溶液中含10µm 以上的不溶性微粒20 粒以下,
含25µm 以上的不溶性微粒5 粒以下
五 、 貯藏及保存期限
18℃-25℃避光保存,有效期兩年。啟封后置4℃保存,有效期一周。
注:若保證無微生物污染,啟封后可置4℃長期保存。但應(yīng)注意保存溫度較低時本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
鴨臟器組織淋巴細胞分離液試劑盒訂購說明:
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當日發(fā)貨。
2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預(yù)訂,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動以訂貨當日新價格為準。
4、每日訂單截止時間為16點整,部分城市可到17點整,因超過截止時間造成當日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請辦理完貨款后,將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。
運輸說明:
1、極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航。
2、低溫產(chǎn)品:低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴實密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航。
3、常溫產(chǎn)品:常溫產(chǎn)品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨,準確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達您的手中。
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