產(chǎn)品名稱:單脫氫抗壞血酸還原酶活性檢測試劑盒
產(chǎn)品型號:BC0650
產(chǎn)品特點:單脫氫抗壞血酸還原酶活性檢測試劑盒測定意義:MDHAR 催化 MDHA 還原MDHA 生成 AsA;在抗壞血酸氧化還原代謝中具有重要作用。測定原理:MDHAR 催化 NADH 還原MDHA 生成 AsA和NAD+,NADH在340nm有特征吸收峰,但NAD+沒有。通過測定340nm光吸收下降速率,來計算MDHAR活性。
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單脫氫抗壞血酸還原酶活性檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣 產(chǎn)品商標:solarbio
保存與運輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價格:1040
庫存狀態(tài):現(xiàn)貨
關(guān)鍵字:單脫氫抗壞血酸還原酶|抗壞血酸還原酶|MDHAR活性檢測|試劑盒
簡要介紹:
MDHAR 催化 MDHA 還原MDHA 生成 AsA;在抗壞血酸氧化還原代謝中具有重要作用。MDHAR 催化 NADH 還原MDHA 生成 AsA和NAD+,NADH在340nm有特征吸收峰,但NAD+沒有。通過測定340nm光吸收下降速率,來計算MDHAR活性。
產(chǎn)品詳細描述
商品貨號: | 商品品牌: | 規(guī)格 | 基本售價: | 選擇規(guī)格 |
BC0650-50管/48樣 | Solarbio | 50管/48樣 | 1040.00元 |
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 40mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前加入 5mL 蒸餾水充分溶解。
試劑三:粉劑×1 瓶,-20℃避光保存。臨用前加入 5mL 蒸餾水充分溶解。
試劑四:液體×1 瓶,-20℃避光保存。臨用前加 5mL 試劑一充分溶解。
產(chǎn)品說明:
MDHAR 催化 MDHA 還原生成 AsA,在抗壞血酸氧化還原代謝中具有重要作用。 MDHAR 催化 NADH 還原 MDHA 生成 AsA 和 NAD+,NADH 在 340 nm 有特征吸收峰,但 是 NAD+沒有。通過測定 340 nm 光吸收下降速率,來計算出 MDHAR 活性。
實驗中所需儀器及設(shè)備: 研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計、1mL 石英比色皿、可調(diào)式移液槍和雙蒸水。
操作步驟:
一、粗酶液提?。?
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)1:5-10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。10000rpm,4℃離心 10min,取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(10 4個):提取液體積(mL)為 500-1000:1 的比例(建議 500 萬 細胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲超聲破碎細胞(功率 300w,超聲 3s,間隔 7s,總時間 3min); 然后 10000rpm,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測。
二、MDHAR 測定操作:
1. 分光光度計預(yù)熱 30 min,調(diào)節(jié)波長到 340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一在 25℃水浴鍋中預(yù)熱 30 min。
3. 依次在石英比色皿中加入下列試劑
試劑名稱(μL) | 試劑二 | 試劑三 | 試劑四 | 試劑一 | 蒸餾水 | 上清液 |
空白管 | 100 | 100 | 100 | 600 | 100 | |
測定管 | 100 |
迅速混勻后于 340nm 比色,記錄 30s 和 150s 的吸光值。分別記為 A1、A2,ΔA=A1-A2,得到 △A 測定、△A 空白。
三、MDHAR 活性計算:
(1)按蛋白濃度計算
MDHAR 活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1μmol NADH 為一個酶活單位。 MDHAR (U/mg prot) = [(△A 測定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反總×10 6]÷(Cpr×V 樣)÷T =0.804×(△A 測定管-△A 空白管) ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
MDHAR 活性單位定義:25℃中每克樣品每分鐘氧化 1μmol NADH 為 1 一個酶活單位。 MDHAR (U/g 鮮重) =[(△A 測定-△A 空白)÷(ε×d)×V 反總×10 6]÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T =0.804×(△A 測定管-△A 空白管) ÷W
(3)按細胞數(shù)量計算
MDHAR 活性單位定義:25℃中每 10 4個細胞每分鐘氧化 1μmol NADH 為 1 一個酶活單位。 MDHAR (U/10 4 cell) =[ (△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×10 6]÷(細胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總)÷T =0.804×(△A 測定管-△A 空白管) ÷細胞數(shù)量
ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6220 L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;10 6:1mol=1×10 6μmol;V 反 總:反應(yīng)體系總體積,1mL=0.001 L;V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,100μL=0.1mL;V 樣總: 提取液體積,1mL;Cpr:上清液蛋白濃度,mg/mL,蛋白質(zhì)濃度需要另外測定,建議使用本公司蛋 白質(zhì)含量 BCA 試劑盒;W :樣品質(zhì)量,g;細胞數(shù)量:以 10 4為單位計量,萬個;T:反應(yīng)時間, 2min
相關(guān)文獻:
《Exogenous 24-Epibrassinolide alleviates oxidative damage from copper stress in grape (Vitis vinifera L.) cuttings》 作者:Ya-li Zhou,Su-fang Huo,Li-ting Wang,Jiang-fei Meng,Zhen-wen Zhang,Zhu-mei Xi 期刊:Plant Physiology and Biochemistry 影響因子:3.404 PMID:30099273
單脫氫抗壞血酸還原酶活性檢測試劑盒
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