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產(chǎn)品名稱:NADH氧化酶(NOX)活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品型號(hào):BC0630

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):NADH氧化酶(NOX)活性檢測(cè)試劑盒
測(cè)定意義:NOX(EC 1.6.99.3)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,可在氧氣存在下,直接將NADH氧化為NAD。該酶不僅參與NAD的再生,而且與免疫反應(yīng)密切相關(guān)。
測(cè)定原理:NOX能夠?qū)ADH氧化為NAD,NADH的氧化與2,6二氯酚靛藍(lán)(DCPIP)的還原相偶聯(lián),藍(lán)色的DCPIP被還原為無(wú)色的DCPIP,在600nm下測(cè)定藍(lán)色DCPIP的

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BC0630NADH氧化酶(NOX)活性檢測(cè)試劑盒的詳細(xì)資料:

產(chǎn)品名稱:NADH氧化酶(NOX)活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品英文名: NADH Oxidase(NOX) Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào):BC0630              產(chǎn)地:北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣    產(chǎn)品商標(biāo):solarbio
保存與運(yùn)輸:4保存或-20保存;            參考價(jià)格:560
庫(kù)存狀態(tài):現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字:NADH氧化酶試劑盒|活性檢測(cè)試劑盒| NOX活性檢測(cè)|試劑盒

簡(jiǎn)要介紹:
NOX(EC 1.6.99.3)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,可在氧氣存在下,直接將NADH氧化為NAD。該酶不僅參與NAD的再生,而且與免疫反應(yīng)密切相關(guān)。NOX能夠?qū)ADH氧化為NAD,NADH的氧化與2,6二氯酚靛藍(lán)(DCPIP)的還原相偶聯(lián),藍(lán)色的DCPIP被還原為無(wú)色的DCPIP,在600nm下測(cè)定藍(lán)色DCPIP的還原速率計(jì)算出NADH氧化酶活性的大小。

產(chǎn)品詳細(xì)描述

商品貨號(hào):商品品牌:規(guī)格基本售價(jià):選擇規(guī)格
BC0630-50管/24樣Solarbio50管/24樣560.00元



產(chǎn)品內(nèi)容
試劑一:液體 25mL×1 瓶,-20℃保存。
試劑二:液體 5mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 0.5mL×1 瓶,-20℃保存。
試劑四:液體 70mL×1 瓶,4℃保存。
試劑五:液體 10 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑六:粉劑×2 瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入 9mL 雙蒸水,用不完的試劑仍-20℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明
NOX(EC 1.6.99.3)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,可在氧氣存在下,直接將 NADH 氧化為 NAD。該酶不僅參與 NAD 的再生,而且與免疫反應(yīng)密切相關(guān)。 NOX 能夠?qū)?NADH 氧化為 NAD,NADH 的氧化與 2,6 二氯酚靛藍(lán)(DCPIP)的還原相偶聯(lián), 藍(lán)色的 DCPIP 被還原為無(wú)色的 DCPIP,在 600nm 下測(cè)定藍(lán)色 DCPIP 的還原速率計(jì)算出 NADH 氧化 酶活性的大小。
自備儀器和試劑  可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水

操作步驟
一、樣品測(cè)定的準(zhǔn)備:
1、 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:
2、 準(zhǔn)確稱取 0.1g 組織或收集 500 萬(wàn)細(xì)胞,加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽 勻漿。
3、 將勻漿 600g,4℃離心 5min。
4、 將上清液移另一離心管中,11000g,4℃離心 10min。
5、 將上清液轉(zhuǎn)移另一 EP 管中,用于線粒體中泄露 NOX 活性測(cè)定。
6、 沉淀即為線粒體,加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三,用于 NOX 活性測(cè)定。
7、 NOX 總酶活即為上清中 NOX 活性與沉淀中 NOX 活性之和。
二、測(cè)定步驟和加樣表:
1、可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上;
2、試劑四 37℃保溫放置。

試劑名稱(µL)測(cè)定管對(duì)照管
試劑四700700
試劑五100100
樣本4040
蒸餾水 160
試劑六160 

將上述試劑按順序在 1mL 玻璃比色皿中操作,加入試劑六后立即混勻,同時(shí)開始計(jì)時(shí),在 600nm 波長(zhǎng)下記錄 20 秒時(shí)的初始吸光度 A1,迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入 37℃水浴中,準(zhǔn)確反應(yīng) 1 分鐘。迅速取出比色皿并擦干,記錄 1 分 20 秒時(shí)的吸光度 A2。計(jì)算 ΔA=A1-A2,記錄 A 測(cè)定、A 對(duì)照,ΔA1=ΔA 上清測(cè)定-ΔA 上清對(duì)照,ΔA2=ΔA 沉淀測(cè)定-ΔA 沉淀對(duì)照。
三、NOX 活力單位的計(jì)算: 
A、上清中 NOX 活力的計(jì)算: 
1、組織中 NOX 活力的計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX(U/mg prot)=ΔA1÷0.01×V 反總÷(Cpr 上清×V 樣本)=2500×ΔA1÷Cpr 上清

  1. 按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX(U/g 鮮重)=ΔA1÷0.01×V 反總÷(W÷V 提取×V 樣本)=2525×ΔA1÷W
 2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中 NOX 活力的計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX(U/mg prot)=ΔA1÷0.01×V 反總÷(Cpr 上清×V 樣本)=2500×ΔA1÷Cpr 上清

  1. 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX(U/104 cell)=ΔA1÷0.01×V 反總÷(500÷V 提取×V 樣本)=5.05×ΔA1 V 反總:反應(yīng)總體積,1mL;V 樣本:加入樣本體積,0.04mL;V 提?。杭尤胩崛∫后w積,1.01mL; Cpr 上清:上清中蛋白濃度,mg/mL;W,樣本鮮重,g;500,細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬(wàn)。

B、沉淀中 NOX 活力的計(jì)算:
1、組織中 NOX 活力的計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX(U/mg prot)=ΔA2÷0.01×V 反總÷(Cpr 沉淀×V 樣本)=2500×ΔA2÷Cpr 沉淀

  1. 按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX(U/g 鮮重)=ΔA2÷0.01×V 反總÷(W÷V 樣總×V 樣本)=505×ΔA2÷W
2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中 NOX 活力的計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX(U/mg prot)=ΔA2÷0.01×V 反總÷(Cpr 沉淀×V 樣本)=2500×ΔA2÷Cpr 沉淀
2按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX(U/104 cell)=ΔA2÷0.01×V 反總÷(500÷V 樣總×V 樣本)=1.01×ΔA2 V 反總:反應(yīng)總體積,1mL;V 樣本:加入樣本體積,0.04mL;V 樣總:沉淀重懸體積,0.202mL; Cpr 沉淀:沉淀重懸后蛋白濃度,mg/mL;W,樣本鮮重,g;500,細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬(wàn)。

C、樣本 NOX 總活力的計(jì)算: 樣本 NOX 總活力即為上清中 NOX 活力與沉淀中 NOX 活力之和。
1、組織中 NOX 活力的計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX(U/mg prot)=2500×ΔA1÷Cpr 上清+2500×ΔA2÷Cpr 沉淀
2按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX(U/g 鮮重)=2525×ΔA1÷W +505×ΔA2÷W
2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中 NOX 活力的計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算: 單位的定義:每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX(U/mg prot)=2500×ΔA1÷Cpr 上清+2500×ΔA2÷Cpr 沉淀 (2)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算: 單位的定義:每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。 NOX(U/104 cell)=5.05×ΔA1+1.01×ΔA2

注意事項(xiàng)
1、粗酶液的提取必須在 0℃- 4℃中操做完成,以防止酶變性失活。
2、比色皿中反應(yīng)液的溫度保持 37℃,取小燒杯一只裝入一定量的 37℃蒸餾水,將此燒杯放入 37℃水浴鍋中。在反應(yīng)過(guò)程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
3、兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn),一個(gè)人比色,一個(gè)人計(jì)時(shí),以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4、實(shí)驗(yàn)時(shí),試劑六樣本在冰上放置,以免變性和失活。

相關(guān)文獻(xiàn):

《Identification and characterization of GmMYB118 responses to drought and salt stress》 作者:Yong-Tao Du, Meng-Jie Zhao, Chang-Tao Wang, Yuan Gao, Yan-Xia Wang, Yong-Wei Liu, Ming Chen, Jun Chen, Yong-Bin Zhou, Zhao-Shi Xu & You-Zhi Ma  期刊:BMC Plant Biology 影響因子:3.67 PMID:30509166
《A combinational optimization method for efficient synthesis of tetramethylpyrazine by the recombinant Escherichia coli》 作者:Youqiang Xu,Chunyan Xu,Xiuting Li,Baoguo Sun,Ahmed Alaa Eldin,Yingmin Jia 期刊:Biochemical Engineering Journal 影響因子:3.371 PMID:
《Antioxidant and antihyperlipidemic activities of purified polysaccharides from Ulva pertusa》 作者:Weida Li,Kai Wang,Nanfang Jiang,Xiaolei Liu,Minghui Wan, Xintao Chang, Dongmei Liu, Huimin Qi,Shunmei Liu 期刊:Journal of Applied Phycology 影響因子:4.784 PMID:29476858
《Sensory plasticity of carotid body is correlated with oxidative stress in paraventricular nucleus during chronic intermittent hypoxia》 作者:Pei Liu  Hong‐Mei Zhang  Ke Hu  Xiu‐Fang Zhou  Si Tang 期刊:J Cell Physio 影響因子:4.522 PMID:30609027
 

NADH氧化酶(NOX)活性檢測(cè)試劑盒

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