胰蛋白酶消化液使用說明
使用說明:
1.貼壁細(xì)胞的消化:
a)吸去培養(yǎng)液,用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
b)加入少量胰蛋白酶-EDTA消化液,蓋過細(xì)胞即可,室溫放置1-2分鐘。不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同,對(duì)于貼壁牢固的細(xì)胞可適當(dāng)延長消化時(shí)間。
c)顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來。此時(shí)吸除消化液。加入含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
d)如果發(fā)現(xiàn)消化不足,可加入胰蛋白酶-EDTA消化液重新消化。
e)如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長,未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細(xì)胞,盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2.組織的消化:
不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。