SDS是一種陰離子表面活性劑，能打斷蛋白質(zhì)的氫鍵和疏水鍵，并按一定的比例和蛋白質(zhì)分子結(jié)合成復合物，使蛋白質(zhì)帶負電荷的量遠遠超過其本身原有的電荷，掩蓋了各種蛋白分子間天然的電荷差異。因此，各種蛋白質(zhì)-SDS 復合物在電泳時的遷移率，不再受原有電荷和分子形狀的影響，而只是棒長的函數(shù)。這種電泳方法稱為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（簡稱SDS—PAGE）。實驗使用過程中，還加入DTT或者巰基乙醇，以打開蛋白間的二硫鍵，破壞蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)。SDS—PAGE常采用垂直板不連續(xù)系統(tǒng)（分離膠與濃縮膠）。
本公司有多種用于樣品制備的組織裂解液，每款裂解液會配備一管蛋白酶抑制劑pmsf。本公司還有多種蛋白酶抑制劑供您使用。
| 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 |
|---|---|
| R0010 | RIPA_ |
| R0020 | 普通RIPA |
| R0030 | 非變性組織細胞裂解液 |
| A8260 | Aprotinin 蛋白酶抑制劑（抑肽酶） |
| P8100 | Pepstatin A 胃蛋白酶抑制劑 |
| P1260 | (All-in-one,100x)蛋白磷酸酶抑制劑混合物 |
| T8031 | Trypsin inhibitor 胰蛋白酶抑制劑 |
| P1260 | (All-in-one,100x)蛋白磷酸酶抑制劑混合物 |
| 539133 | Protease Inhibitor Cocktail Set VI |
| 539134 | Protease Inhibitor Cocktail Set III |
| PC0030 | Lowry法蛋白濃度測定試劑盒 |
| PC0010 | Bradford蛋白濃度測定試劑盒> |
| PC0020 | BCA蛋白濃度測定試劑盒 |
注：本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑，所以不適合于Bradford蛋白濃度測定試劑盒，請選擇BCA法或者Lowry法。
| 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 說明 |
|---|---|---|
| R0010 | RIPA組織/細胞裂解液 | 在普通RIPA的基礎(chǔ)上改進而來,含蛋白酶抑制劑及磷酸酶抑制劑(配有一支PMSF) |
| R0020 | RIPA組織/細胞裂解液 | RIPA經(jīng)典配方，適于絕大多數(shù)蛋白-蛋白相互作用的免疫實驗。組成： 50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.(配有一支PMSF) 保存： 4 ºC避光 |
| R0030 | 非變性組織/細胞裂解液 | 非變性條件下裂解的蛋白產(chǎn)物大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗體結(jié)合或酶學活性，因此適宜于進行免疫共沉淀。 |
| R0050 | 核蛋白提取試劑盒 | |
| BC3640 | 全蛋白提取試劑盒 | |
| BC3720 | 植物蛋白提取試劑盒 | |
| BC3710 | 全蛋白提取試劑盒（強） | |
| BC3711 | 全蛋白提取試劑盒（中） | |
| BC3730 | 磷酸化蛋白提取試劑盒 | |
| BC3740 | 胞漿蛋白提取試劑盒 |
蛋白含量測定是以標準蛋白作為對照，根據(jù)蛋白濃度不同，吸光值不同而達到定量的目的。有些方法是理解蛋白本身的吸光值（紫外光譜吸收法）來定量，但更多的是用染料對蛋白進行染色，利用染料與蛋白結(jié)合顯出與原染料及蛋白不同的吸光值來定量的。后一種方法應用更普遍。蛋白定量方法的選擇，應該考慮到蛋白結(jié)構(gòu)（標準品選擇）、蛋白溶液內(nèi)干擾物等因素的影響。
| 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 組成 | 說明 | |||||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| PC0010 | Bradford蛋白濃度測定試劑盒 |
| 干擾物質(zhì)少， Tris、糖、甘油、巰基乙醇、氨、EDTA等均不干擾測定。 | |||||||||||||||
| PC0020 | BCA蛋白濃度測定試劑盒 |
| BCA法的顯著優(yōu)點是不受去垢劑的影響。 | |||||||||||||||
| PC0030 | Lowry法蛋白濃度測定試劑盒 |
| Lowry法測定較為不受脂類物質(zhì)干擾，適于脂類含量較高的樣品測定。也能耐受相當濃度的去垢劑如SDS。 |
SDS-PAGE如今已形成成熟的方案，實驗室可根據(jù)自己的情況和習慣來選擇試劑。如選擇1、2、3、4、5、6、7、8、9全部試劑可自己配制。也可以選擇配制好的試劑。如10、11、12、13/14、16、9、20。還可選擇10、13/14、16、9、17、18、19、20。
| 系號 | 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 系號 | 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 |
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | T8060 | TRIS 三羥甲基氨基甲烷 | 11 | S1051 | 4XSDS-PAGE分離膠緩沖液（PH=8.8） |
| 2 | G8200 | Glycine 甘氨酸 | 12 | S1052 | 4XSDS-PAGE濃縮膠緩沖液（PH=6.8） |
| 3 | S8010 | SDS 十二烷基硫酸鈉 | 13 | P1016 | 4×蛋白上樣緩沖液(含β-巰基乙醇) |
| 4 | A8080 | Acrylamide 丙烯酰胺 | 14 | P1015 | 4×蛋白上樣緩沖液(含DTT) |
| 5 | M8200 | N,N-Methylene Bisacrylamide甲叉雙丙烯酰胺 | 15 | D1070 | 1M DTT |
| 6 | A8090 | Ammonium Persulfate 過硫酸胺 | 16 | A1030 | 10%過硫酸氨 |
| 7 | D8220 | DTT 二硫蘇糖醇 | 17 | T1020 | 1M Tris-HCL (PH6.8) |
| 8 | M8210 | β-Mercaptoethanol β-巰基乙醇 | 18 | T1010 | 1.5M Tris-HCL(PH8.8) |
| 9 | T8090 | TEMED 四甲基乙二胺 | 19 | S1010 | 10%SDS |
| 10 | A1010 | 30%丙烯酰胺（29:1） | 20 | T1070 | 5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液 |
凝膠配制表（一）
| 分離膠12% | 分離膠10% | 分離膠8% | 濃縮膠（3%） | |
|---|---|---|---|---|
| 總體積 | 10ml | 10ml | 10ml | 5ml |
| 4X分離膠緩沖液（PH8.8） | 2.5ml | 2.5ml | 2.5ml | 0 |
| 4X濃縮膠緩沖液（PH6.8） | 0 | 0 | 0 | 1.25ml |
| 30%丙烯酰胺(29:1) | 4ml | 3.3ml | 2.7ml | 0.5ml |
| ddH2O | 3.4ml | 4.1ml | 4.7ml | 3.2ml |
| 10%過硫酸銨 | 100ul | 100ul | 100ul | 75ul |
| TEMED | 10ul | 10ul | 10ul | 7.5ul |
凝膠配制表（二）
| 分離膠12% | 分離膠10% | 分離膠8% | 濃縮膠（3%） | |
|---|---|---|---|---|
| 總體積 | 10ml | 10ml | 10ml | 5ml |
| 30%丙烯酰胺(29:1) | 4ml | 3.3ml | 2.7ml | 0.5ml |
| 1M Tris-HCL (PH6.8) | 0 | 0 | 0 | 0.625ml |
| 1.5M Tris-HCL(PH8.8) | 2.5ml | 2.5ml | 2.5ml | 0 |
| 10%SDS | 100ul | 100ul | 100ul | 50ul |
| ddH2O | 3.3ml | 4.0ml | 4.6ml | 3.75ml |
| 10%過硫酸銨 | 100ul | 100ul | 100ul | 75ul |
| TEMED | 10ul | 10ul | 10ul | 7.5ul |
本公司的丙烯酰胺是29：1的，如需要定制其他規(guī)格的可以。 為了客戶實驗方便，我們生產(chǎn)的SDS-PAGE凝膠制備試劑盒（P1200）和Tris- Tricine-SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒（P1320），后者主要用于小于10kd的蛋白和多肽的分離。包含了制膠的全部試劑，方便客戶操作。 如果您想節(jié)省時間，也可以使用我們的預制膠，無需配膠，直接跑電泳即可。本公司的上樣緩沖液既有用于非變性的（P1017、p1027）又有變性的（P1015、P1016、P1017、P1018），有不同的稀釋倍數(shù)，可以滿足客戶的多種實驗需求。 電泳緩沖液既有用于普通的tris-甘氨酸緩沖系統(tǒng)的產(chǎn)品（T1070），又有用于Bis-tris這種系統(tǒng)的MOPS緩沖液（T1510） 蛋白marker有多種，非預染marker、預染marker、彩虹marker、Western Blot Marker。而且還有GE原裝的變性非變性marker，廣泛的分子量和用途供您選擇。
| 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 |
|---|---|---|---|
| P1015 | 4×蛋白上樣緩沖液（含DTT） | P1016 | 4×蛋白上樣緩沖液（含β-巰基乙醇） |
| P1018 | 2×蛋白上樣緩沖液（含DTT） | P1019 | 2×蛋白上樣緩沖液（含β-巰基乙醇） |
| P1017 | 4×非變性蛋白上樣緩沖液 | p1027 | 2×非變性蛋白上樣緩沖液 |
| T1070 | 5×Tris甘氨酸電泳緩沖液 | T1510 | Tris-Mops緩沖液(10×) |
| PR1300-15 | 次高分子量蛋白質(zhì)標準 15T | PR1400-20 | 低分子量蛋白質(zhì)標準(14.4-97.4KD) 20T |
| PR1500-10 | 次高分子量蛋白質(zhì)標準 10T | PR1600-20 | 預染低分子量蛋白質(zhì)(14.4-97.4KD) 20T |
| PR1700-10 | 預染次高分子量蛋白質(zhì)標準 10T | PR1800-10 | Western Blot Marker 10T(50ul） |
| PR1900 | 預染超低分子量蛋白marker（3.3-31KD) 20T | PR1910 | 彩虹180廣譜蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1) |
| PR1920 | 彩虹245廣譜蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1) | PR1930 | 彩虹245plus廣譜蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1) |
跑膠后的染色可以用銀染或者考染的方法，如果蛋白量少，推薦使用靈敏度高一些的銀染試劑盒（G7210），否則常規(guī)染色可以使用（P1305）和（P1300），其中P1300的優(yōu)點是染色時間短，半小時內(nèi)即可檢測到蛋白電泳條帶，節(jié)省了染色脫色的時間。
| 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 |
|---|---|
| C8430 | 考馬斯亮藍R 250染色液 |
| P1300 | 考馬斯亮藍蛋白膠快速染色液 |
| P1305 | 考馬斯亮藍染色套裝 |
| G7210 | PAGE凝膠銀染試劑盒 |
| PG00810-S | Precast-Gel預制膠 | 變性預制膠 | 10孔 | 8% | 10片/盒 |
| PG01010-S | Precast-Gel預制膠 | 變性預制膠 | 10孔 | 10% | 10片/盒 |
| PG01210-S | Precast-Gel預制膠 | 變性預制膠 | 10孔 | 12% | 10片/盒 |
| PG01510-S | Precast-Gel預制膠 | 變性預制膠 | 10孔 | 15% | 10片/盒 |
| PG41510-S | Precast-Gel預制膠 | 變性預制膠 | 10孔 | 4～15% | 10片/盒 |
| PG42010-S | Precast-Gel預制膠 | 變性預制膠 | 10孔 | 4～20% | 10片/盒 |
| PG82010-S | Precast-Gel預制膠 | 變性預制膠 | 10孔 | 8～20% | 10片/盒 |
| PG00810-N | Precast-Gel預制膠 | 非變性預制膠 | 10孔 | 8% | 10片/盒 |
| PG01010-N | Precast-Gel預制膠 | 非變性預制膠 | 10孔 | 10% | 10片/盒 |
| PG01210-N | Precast-Gel預制膠 | 非變性預制膠 | 10孔 | 12% | 10片/盒 |
| PG01510-N | Precast-Gel預制膠 | 非變性預制膠 | 10孔 | 15% | 10片/盒 |
| PG41510-N | Precast-Gel預制膠 | 非變性預制膠 | 10孔 | 4-15% | 10片/盒 |
| PG42010-N | Precast-Gel預制膠 | 非變性預制膠 | 10孔 | 4～20% | 10片/盒 |
| PG82010-N | Precast-Gel預制膠 | 非變性預制膠 | 10孔 | 8～20% | 10片/盒 |
經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分，此技術(shù)稱為免疫印跡（Western blot）。Western blotting檢測系統(tǒng)除需要過氧化物酶標記的各種二抗外，還需要配套的顯色試劑。索萊寶提供DAB顯色和ECL化學發(fā)光兩種試劑及相應試劑盒。
和PALL公司的尼龍膜和pvdf膜，具有0.22um和0.45um兩種規(guī)格。 轉(zhuǎn)膜后還可以用P0012（10×麗春紅）檢測轉(zhuǎn)膜效果，尤其是針對NC膜效果更佳。 為了節(jié)省成本和時間，您可以選擇本公司的SW3020（Western Blot膜再生液）對用過的膜進行清洗，隨后，可以使用不同的抗體進行下一輪Western Blot實驗。 膜再生液實質(zhì)是在不影響膜上結(jié)合的抗原的條件下將抗體洗脫下來，實際操作中，膜類型、抗體類型、濃度及抗原特性都影響洗脫難易度。 注意：適用于 ECL和類似的化學發(fā)光試劑進行的 Western 檢測。不適用于非化學發(fā)光試劑進行的 Western檢測，例如DAB，NBT/BCIP。
| 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 |
|---|---|
| P0012 | 10×麗春紅 |
| SW3010 | 膜封閉液 |
| A1800 | 抗體稀釋液 |
| A1810 | 一抗稀釋液 |
| A1820 | HRP標記抗體稀釋液 |
| A1830 | AP標記抗體稀釋液 |
| A1840 | 熒光抗體稀釋液 |
| T1085 | 1×TBST |
實驗操作過程中您可以針對不同的抗體選擇上面合適的稀釋液。
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