胎牛血清的主要應用是什么?
血清通常作為補充成分添加在基礎培養(yǎng)基內(nèi)使用。它能夠提供各種大分子蛋白,小分子量營養(yǎng),水溶性成分的轉運蛋白,和其它一些細胞在體外所必需的成分,如激素和附著因子。血清可以結合或中和一些生長因子中的有毒成分,并提供培養(yǎng)基的緩沖能力。
細胞培養(yǎng)時血清的添加依賴于基礎培養(yǎng)基的化學組成,培養(yǎng)細胞的類型,及所用的培養(yǎng)系統(tǒng)。
胎牛血清各項質(zhì)量指標符合2005版《中華人民共和國藥典》第三部附錄的要求。
1、性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。
2、蛋白質(zhì)含量 3.5%~5.0%( w/v)
3、血紅蛋白含量 ≤0.02%( w/v)
4、無菌檢驗 陰性
5、支原體檢驗 陰性
6、細菌內(nèi)毒素 ≤5(EU/ml)
7、牛腹瀉病毒 陰性
8、大腸桿菌噬菌體 陰性
9、支持細胞增殖(Sp2/0-Ag14) 生長曲線(接種濃度)大增殖濃度≥2.5×106 個/ml 細胞倍增時間 ≤15h 克隆率≥85%血清的主要成分: 血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。
血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等,這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。
胎牛血清應取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。 顯然,胎牛血清是品質(zhì)搞的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分少。
功能:牛血清是細胞培養(yǎng)中用量大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,常用于動物細胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。
1.提供對維持細胞指數(shù)生長的激素,基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。
2. 提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調(diào)變它們所結合的物質(zhì)活力。
3.有些情況下結合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結合,起到解毒作用。
4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。
5.起酸堿度緩沖液作用。
6.提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。