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支原體（mycoplasma）：又稱(chēng)霉形體，為目前發(fā)現(xiàn)的小的簡(jiǎn)單的原核生物?；驍?shù)量為480。支原體細(xì)胞中*可見(jiàn)的細(xì)胞器是核糖體。

培養(yǎng)支原體的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)要求比一般細(xì)菌高，除基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外還需加入10～20%人或動(dòng)物血清以提供支原體所需的膽固醇。適pH7.8～8.0之間，低于7.0則死亡，但解脲支原體是個(gè)例外，它的適pH在6.0～6.5之間。

支原體污染的來(lái)源包括工作環(huán)境的污染、培養(yǎng)基的污染、操作者本身的污染、污染支原體的細(xì)胞造成的交叉污染、實(shí)驗(yàn)器材帶來(lái)的污染和用來(lái)制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染。

分離培養(yǎng)法：

分離培養(yǎng)法是支原體檢測(cè)的金標(biāo)方法，其檢測(cè)度高。這種方法是從可疑的細(xì)胞培養(yǎng)體系中取樣，并接種到適宜支原體生長(zhǎng)的瓊脂平板上。如果樣本中含有支原體，它們就會(huì)在這種瓊脂平板上*生長(zhǎng)，終形成明顯可見(jiàn)的特征性菌落。分離培養(yǎng)法基本不會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果，因此被譽(yù)為支原體檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)。不過(guò)分離培養(yǎng)法也存在兩個(gè)弊端，一是檢測(cè)時(shí)間太長(zhǎng)，支原體要長(zhǎng)出明顯克隆少需要4周時(shí)間。二是盡管可以檢測(cè)絕大多數(shù)支原體種類(lèi)，分離培養(yǎng)法也有力所不及的時(shí)候。

如果你實(shí)在不想等這么久，或者希望在分離培養(yǎng)法的等待過(guò)程中先拿到初步結(jié)果，你可以試一試DNA、PCR或酶學(xué)檢測(cè)方法。不過(guò)需要注意的是，上述檢測(cè)方法都不能單獨(dú)檢出所有類(lèi)型的支原體，而且靈敏度也沒(méi)有分離培養(yǎng)法高，所以好結(jié)合使用兩種方法以獲得可靠的檢測(cè)結(jié)果。

DNA檢測(cè)需要將可疑樣品與指示細(xì)胞共同培養(yǎng)，因此一般需要幾天時(shí)間。DNA檢測(cè)所用的指示細(xì)胞通常是細(xì)胞質(zhì)區(qū)域較大的Vero細(xì)胞，如果原樣本中含有支原體，那么當(dāng)細(xì)胞DNA被熒光染料（如Hoechst染料）染色時(shí)，就可以在指示細(xì)胞的核周?chē)^察到熒光斑點(diǎn)或熒光顆粒。分離培養(yǎng)法用來(lái)檢測(cè)支原體M. hyorhinis菌株并不可靠，而DNA法可以準(zhǔn)確的將其檢測(cè)出來(lái)。

PCR法：

PCR法也可以檢測(cè)M. hyorhinis菌株，PCR法檢測(cè)支原體只需幾個(gè)小時(shí)，是快但也是不靈敏的支原體檢測(cè)方法。該方法采用針對(duì)支原體DNA的引物用PCR檢測(cè)可疑樣本，其中PCR引物通常針對(duì)支原體的16S rRNA基因。在凝膠電泳過(guò)程中，支原體DNA會(huì)顯示為特異性條帶，以此指示支原體的存在。PCR法可以檢測(cè)大多數(shù)支原體，但謹(jǐn)慎起見(jiàn)好同時(shí)使用另一種檢測(cè)方法來(lái)進(jìn)行驗(yàn)證。

酶學(xué)檢測(cè)和ELISA：

此外，也還存在一些其他支原體檢測(cè)方法。例如酶學(xué)檢測(cè)是將可疑樣本添加到特定底物中，在這一體系內(nèi)支原體的酶可以將ADP轉(zhuǎn)化為ATP，隨后能利用ATP發(fā)光的luciferase酶就可以指示支原體的存在。ELISA也能用于支原體檢測(cè)，以ELISA法為基礎(chǔ)的支原體檢測(cè)一般使用針對(duì)支原體16S rRNA基因的帶標(biāo)記探針或抗體，來(lái)檢測(cè)培養(yǎng)物中是否含有支原體。

北京索萊寶科技有限公司為生化試劑供應(yīng)商，專(zhuān)業(yè)生產(chǎn)銷(xiāo)售生化試劑、生物試劑、細(xì)胞培養(yǎng)基、試劑盒、實(shí)驗(yàn)耗材等產(chǎn)品。支原體檢測(cè)試劑盒是索萊寶自產(chǎn)產(chǎn)品，其貨號(hào)為CA1080。支原體用普通染色法不易著色，用姬姆薩染色很淺，革蘭氏染色為陰性。索萊寶支原體檢測(cè)試劑盒利用熒光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）檢測(cè)支原體污染。這種染料會(huì)結(jié)合到DNA的A-T富集區(qū)域，因?yàn)橹гw的DNA中A-T含量高（55％～80％），所以可將其染色而被檢測(cè)到。被支原體污染的細(xì)胞經(jīng)染色后在細(xì)胞周?chē)煽吹皆S多大小均一的熒光小點(diǎn)，即為支原體的DNA染色斑，說(shuō)明有支原體污染。Hoechst 33258的大激發(fā)波長(zhǎng)為346nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為460nm；Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后，大激發(fā)波長(zhǎng)為352nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。