β-葡萄糖苷酶(β-GC)活性檢測試劑盒

產品名稱: β-葡萄糖苷酶(β-GC)活性檢測試劑盒

產品英文名: β-glucosidase（β-GC） Assay Kit

產品貨號：BC2560               產地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產品規(guī)格：50管/24樣             產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：650
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關鍵字: β-葡萄糖苷酶檢測試劑盒|β-GC檢測試劑盒|β-葡萄糖苷酶|試劑盒

簡要介紹：
β-GC（EC 3.2.1.21）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，催化β-糖苷鍵水解，具有多方面生理作用：在纖維素的糖化作用中，β-GC負責進一步水解纖維素二糖和纖維素寡糖生成葡萄糖；β-GC水解萜烯類香氣前驅體，使糖苷鍵合態(tài)變成游離態(tài)。從而產生香味；β-GC能夠水解植物體內野黑櫻苷，釋放HCN，從而防止昆蟲取食。
β-GC分解對-硝基ben-β-D-吡喃葡萄糖苷生成對-硝基ben酚，后者在400nm有大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算β-GC活性。


產品詳細描述
產品內容：
提取液：液體50ml×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×2瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入10ml雙蒸水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。
試劑二：液體25ml×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體80ml×1瓶，4℃保存。  
標準品：液體1ml×1支，取1.5ml EP管加入1ml，5μmol/ml的對硝基ben酚溶液。


產品說明：
β-GC（EC 3.2.1.21）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，催化β-糖苷鍵水解，具有多方面生理作用：在纖維素的糖化作用中，β-GC負責進一步水解纖維素二糖和纖維素寡糖生成葡萄糖；β-GC水解萜烯類香氣前驅體，使糖苷鍵合態(tài)變成游離態(tài)。從而產生香味；β-GC能夠水解植物體內野黑櫻苷，釋放HCN，從而防止昆蟲取食。
β-GC分解對-硝基ben-β-D-吡喃葡萄糖苷生成對-硝基ben酚，后者在400nm有大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算β-GC活性。

需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣品的前處理：   

1. 細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

3、標準樣品的準備：取100μL標準液，加入到400μL試劑三中，得到1μmol/ml標準液，十倍稀釋到100nmol/ml，倍比稀釋：50、25、12.5、6.25nmol/ml，稀釋液用試劑二。100、50、25、12.5、6.25nmol/ml做標準液。
二、測定步驟：

1. 分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長400nm，蒸餾水調零。
2. 加樣表

β- GC 活力單位的計算： 
1、標準曲線建立：根據(jù)標準管的濃度（y）和吸光度（x），建立標準曲線。
2、根據(jù)標準曲線，將ΔA（x）帶入公式計算樣品產物濃度（nmol/ml）。
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白在每ml每小時產生1nmol對-硝基ben酚定義為一個酶活力單位。
β-GC活力(U/mg prot)=(y×V反總)÷(V樣×Cpr)÷T=20×y÷Cpr
需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織在每ml每小時產生1nmol對-硝基ben酚定義為一個酶活力單位。
β-GC活力(U/g鮮重) = (y×V反總)÷(W×V樣÷V樣總)÷T=20×y÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞在每ml每小時產生1nmol對-硝基ben酚定義為一個酶活力單位。
β-GC活力(U/10⁴ cell)=(y×V反總)÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.04×y
Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；V反總：反應體系總體積，1ml；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.1ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣品質量，g；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬；T：反應時間，0.5h。

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相關文獻：
《Lactobacillus casei Strain Shirota Enhances the In Vitro Antiproliferative Effect of Geniposide in Human Oral Squamous Carcinoma HSC-3 Cells》 作者:Yu Qian ，Jia-Le Song ，Peng Sun ，Ruokun Yi ， Honglin Liu ， Xia Feng ， Kun-Young Park  and Xin Zhao 期刊:Molecules 影響因子:3.06 PMID:29751513