注意事項(xiàng)：
1、DNA濃度>1mg/ml時(shí)清除內(nèi)毒素效率降低。由于DNA和蛋白質(zhì)本身的性質(zhì)，清除程序可導(dǎo)致10-20％DNA丟
失，所幸的是與清除內(nèi)毒素的艱難相比DNA更容易提取制備。
2、所有溶液應(yīng)用無(wú)內(nèi)毒素的高純水配制，所有器械材料均應(yīng)不含內(nèi)毒素，玻璃器皿可高溫烘烤，非揮發(fā)性水
溶液可高壓120℃高溫處理。
內(nèi)毒素簡(jiǎn)介：
內(nèi)毒素(endotoxin)原稱熱原，是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外膜及其它微生物細(xì)胞壁的主要組成成分，其化學(xué)本質(zhì)為脂多糖，
主要由O-特異性鏈、核心多糖和類脂A三部分組成。脂多糖共價(jià)連接到非極性的疏水性類脂A(Lipid A)形成帶負(fù)電荷的大分
子，同時(shí)還具有一個(gè)親水性的寡糖核，因而具有疏水和親水雙重性質(zhì)。制備質(zhì)粒DNA和重組蛋白時(shí)，細(xì)菌破壁之后將釋放大
量脂多糖。無(wú)論是普通制備純化程序，還是離子交換、凝膠排阻過(guò)濾，甚是氯化銫超速離心等制備程序，脂多糖不可
避免地與DNA或蛋白質(zhì)牢固結(jié)合而被共同純化。脂多糖具有強(qiáng)烈的免疫活性和細(xì)胞毒性，并能產(chǎn)生多種復(fù)雜的細(xì)胞生物學(xué)效
應(yīng)，大多數(shù)情況下會(huì)明顯干擾并產(chǎn)生不可預(yù)測(cè)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。例如在DNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，內(nèi)毒素競(jìng)爭(zhēng)性干擾轉(zhuǎn)染試劑與DNA的結(jié)
合，顯著降低轉(zhuǎn)染效率，并產(chǎn)生明顯細(xì)胞毒性，降低外源 |
點(diǎn)擊放大
